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細(xì)胞培養(yǎng)
一、準(zhǔn)備工作
準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。
二、取材
在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞,經(jīng)過(guò)一定的處理后接入培養(yǎng)器血中,這一過(guò)程稱(chēng)為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的初次培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。理論上講各種動(dòng)物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng),實(shí)際上幼體組織比成年個(gè)體的組織容易培養(yǎng),分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理,盡快培養(yǎng),因故不能馬上培養(yǎng)時(shí),可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4℃的培養(yǎng)液中保存。取組織時(shí)應(yīng)嚴(yán)格保持無(wú)菌,同時(shí)也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細(xì)胞時(shí)容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。
三、培養(yǎng)
將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱(chēng)為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個(gè)小時(shí)后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基。如系細(xì)胞培養(yǎng),一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),按要求以一定的量(以每毫升細(xì)胞數(shù)表示)接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)器皿后,立即放入培養(yǎng)箱中,使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長(zhǎng)狀態(tài)。
正在培養(yǎng)中的細(xì)胞應(yīng)每隔一定時(shí)間觀察一次,觀察的內(nèi)容包括細(xì)胞是否生長(zhǎng)良好,形態(tài)是否正常,有無(wú)污染,培養(yǎng)基的PH 是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對(duì)培養(yǎng)溫度和CO2 濃度也要定時(shí)檢查。
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以上是細(xì)胞培養(yǎng)需注意哪些過(guò)程