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白介素檢測試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測定樣品中人白介素的水平。向預先包被了人白介素單克隆抗體的酶標孔中加入白介素,溫育;溫育后,加入生物素標記的抗白介素抗體,再與鏈霉親和素-HRP結合,形成免疫復合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產生藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺與樣品中人白介素的濃度呈正相關。試劑盒的合理操作尤為重要,以下是白介素檢測試劑盒試驗操作要點,為了確保實驗的成功大家有必要了解一下!
1、為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
2、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
3、配制試劑時,要用旋渦混合儀混勻。加入孔內的試劑,充分混勻對測試結果尤為重要,使用微量振蕩器(使用zui低頻率),如無微量振蕩器,可在反應前手工輕輕晃動酶標板1分鐘,例如做圓周動作,使加入孔中的反應液混勻。
4、各步驟加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校準其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間一般控制在5分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
5、實驗用酶標儀應嚴格按使用說明書規(guī)范操作,并在使用前充分預熱。
6、手工洗板應注意:甩掉酶標板內的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
7、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
8、每次試驗測定的同時做標準曲線。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔zui高濃度的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
9、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
10、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按生物廢棄物處理。終止液為2M硫酸,使用時必須注意安全。
11、從2-8℃取出的白介素檢測試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
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